کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-۲۵
نویسندگان
چکیده
چکیده زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25 ، سیناپتوبروین vamp و سینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پروتئین سوبسترای سم عصبی بوتولینوم، سروتیپ های a ،c و e می باشد. هر کدام از این سروتیپ ها به طور اختصاصی و در جایگاه ویژه snap-25 را در یک پیوند آمیدی برش داده و از تشکیل مجموعه ی لنگراندازی و در نهایت اگزوسیتوز نورترانسمیترها و انتقال پیام عصبی جلوگیری می کنند. در آزمایشگاه می توان با تولید snap-25 به روش نوترکیب از آن به عنوان سوبسترای سم، در تشخیص تیپ های e وa سم بوتولیسم بهره برد. روش بررسی: در این مطالعه بر آن شدیم که این پروتئین را به صورت نوترکیب تولید کنیم. برای این منظور cdna ژن مورد نظر با استفاده از روش از rna تام استخراج شده از سلول های مغز موش صحرایی تهیه و توسط rt-pcr تکثیر شد. محصول pcr روی ناقل pet32a همسانه سازی شد و پروتئین نوترکیب بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت و در نهایت با استفاده از یک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی (ni-nta) تخلیص و با کمک آنزیم اینتروکیناز فیوژن از پروتئین مورد نظر جدا شد. یافته ها: در این تحقیق شرایط بهینه برای بیان پروتئین نوترکیب snap-25 ، استفاده از غلظت یک میلی مولار iptg ، مدت زمان انکوباسیون 5 ساعت در دمای 37 درجه ی سانتی گراد تعیین شد. در تخلیص پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون ni-nta ، غلظت 250 میلی مولار ایمیدازول باعث جداسازی و تخلیص پروتئین نوترکیب شد. هم چنین استفاده از آنزیم اینتروکیناز برای برش فیوژن در دمای 37 درجه ی سانتی گراد نسبت به دمای محیط نتایج بهتری را به همراه داشت. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب تخلیص شده ساختار خود را در حین تخلیص از دست نداده و جهت برش و انجام آزمایشات بعدی مناسب و قابل استفاده می باشد. از آن جا که سایر روش های تشخیصی سم بوتولیسم از جمله روش استاندارد تزریق به موش بسیار وقت گیر می باشند لذا استفاده از این محصول نوترکیب به عنوان سوبسترا جهت تشخیص سم در آزمایشگاه می تواند تا اندازه ای مشکلات موجود در روش های قبلی را مرتفع سازد.
منابع مشابه
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25
Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص فیتاز تغییریافته اشرشیاکلی
هدف: فیتازها گروهی از فسفاتازها هستند که قادر به هیدرولیز فیتیک اسید می‌باشند. فیتازها با تجزیه‌ی فیتات قادر به کاهش یا حذف اثرات مخرب فیتات هستند. فیتاز اسیدی و مقاوم دمایی همراه با تولید بالا و خالص و البته یک سیستم نسبتاً ارزان دارای کاربرد در مقیاس وسیع می‌باشد. لذا در این مطالعه با تغییراتی در توالی آنزیم، تولید فیتاز نوترکیب با طول کم‌تر و میزان بیان بیش‌تر مورد بررسی قرار گرفت. مواد و رو...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....
متن کاملکلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت‌ها،از عفونت‌های پوستی تا انتشار آن وعفونت‌های سیستمیک منجر‌شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می‌باشد.مقاومت دارویی در این گروه از پاتوژن‌ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه‌ی عوامل درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوامل می‌باشد،لیزوستافینیک باکتریوسین تولید‌شده به‌وسیله‌ی استافیلوکوک سیمولانس است که باعث کشتن سلول‌های استافیل...
متن کاملکلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت ها،از عفونت های پوستی تا انتشار آن وعفونت های سیستمیک منجر شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می باشد.مقاومت دارویی در این گروه از پاتوژن ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه ی عوامل درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوامل می باشد،لیزوستافینیک باکتریوسین تولید شده به وسیله ی استافیلوکوک سیمولانس است که باعث کشتن سلول های استافیلوکوک او...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانجلد ۱۵، شماره ۵۸، صفحات ۱-۱۰
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023